傳統(tǒng)上,絕大多數(shù)工業(yè)酶制劑的生產(chǎn)是通過特殊微生物的大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng),經(jīng)收集、提取、加工和純化而成的。這需要復雜昂貴的設(shè)備投資及工藝操作,因而生產(chǎn)成本較高。近十年來,隨著以基因工程為核心的生物技術(shù)的迅猛發(fā)展,科學家們通過應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù),將轉(zhuǎn)基因苜蓿作為一種生物反應(yīng)器,用來生產(chǎn)特殊的工業(yè)酶制劑,開辟了苜蓿開發(fā)利用的一個新領(lǐng)域,展示出其潛在的商業(yè)價值。
苜蓿作為生物反應(yīng)器作物,具有其一定的優(yōu)勢。主要表現(xiàn)在:種植面積大(曾是種植面積排列第四位的作物,其種植面積約1.6億畝?,F(xiàn)在我國的種植面積也已達2000多萬畝)、多年生的習性可使其一次播種連續(xù)多年利用、再生性好、產(chǎn)量高、每年收割三茬以上、耕種管理條件要求較低、使用肥料和農(nóng)藥較少、生產(chǎn)成本低、固氮特性利于培肥封、保護環(huán)境等;同時作為轉(zhuǎn)基因的受體植物,在其基因的轉(zhuǎn)化和組織培養(yǎng)再生植株等技術(shù)方面均已建立了較好的研究基礎(chǔ)。
由于工業(yè)、環(huán)保等領(lǐng)域快速發(fā)展,工業(yè)酶制劑的需求量正在劇增。如應(yīng)用于生物制漿、食品加工、碳水化合物及化學品的合成轉(zhuǎn)化、人和動物的食品添加劑、環(huán)境中有毒或污染物的降解去毒等。當前在工業(yè)上常用的酶類中,約有20種可以做到比較便宜地大規(guī)模生產(chǎn)。但有些酶的生產(chǎn)成本是非常高昂的。美國wisconsin大學的研究人員正在研究使用從微生物中克隆目的基因轉(zhuǎn)化苜蓿,然后從轉(zhuǎn)基因苜蓿中提取純化目標酶,從而大大地降低了一些特殊酶的生產(chǎn)成本。
目前研究較為成功的例子有如下兩種酶:第一是mn依賴型的木質(zhì)素過氧化物酶(mn-p)。其編碼基因是從一種叫phanerochaetechrysosporium的微生物基因組中克隆的。它實際上是一種真菌木質(zhì)素降解酶。在工業(yè)上可用于生物制漿和生物漂白。它的表達還可對苜蓿中木質(zhì)素含量產(chǎn)生影響,因而對提高反芻動物的消化率具有意義。同時該基因的表達對苜蓿的生長發(fā)育有不利影響。主要是引起葉片發(fā)黃、植株變矮和產(chǎn)量下降。可能是由于mn-p酶活性,需要將mn2十轉(zhuǎn)化成mn3十,使葉片中缺乏mn2十或是mn3十的積累效應(yīng)危害所致。
將所構(gòu)建的外源基因載體上的組成型啟動子替換成誘導型的啟動子,解決了這一矛盾。利用誘導型啟動子,平時關(guān)閉該基因,在苜蓿收獲前數(shù)天噴施特殊的化學藥品,誘導該基因的高效表達,就避免了其對苜蓿生長發(fā)育的不利影響。又可高效提取該基因表達的特異蛋白質(zhì)。